Ingen övre gräns (UL) är fastställd för biotin. SCF kunde 2001 inte sätta en gräns eftersom systematiska studier av höga doser saknas. Doser upp till 100 mg per dag till patienter med ärftliga ämnesomsättningssjukdomar har inte gett biverkningar, men SCF påpekar att sjukdomen kan ha dolt eventuella effekter och att underlaget inte räcker för slutsatser om mycket höga doser. Livsmedelsverket anger att det sammantagna intaget av biotin inte utgör någon hälsorisk för befolkningen.
Den viktigaste kända risken med höga doser är att biotin kan ge felaktiga svar på blodprover. Många laboratorietester använder biotin i själva mätmetoden, och biotin i blodet kan då ge falskt höga eller falskt låga värden beroende på test, enligt EU:s läkemedelsmyndighets säkerhetskommitté (PRAC) och amerikanska FDA. Exempel är sköldkörtelprover som liknar Graves sjukdom (överaktiv sköldkörtel) hos personer utan symtom, och falskt låga värden för troponin, ett prov som används för att upptäcka hjärtinfarkt. FDA har fått flera rapporter om falskt låga troponinvärden och en rapport om en patient som dog efter ett falskt lågt troponinvärde.
Risken gäller främst höga doser. I en liten studie på sex friska vuxna gav 10 mg biotin per dag i en vecka störningar i 9 av 23 tester som använde biotin, både falskt höga och falskt låga resultat. Enligt FDA innehåller många tillskott för hår, hud och naglar 20 mg biotin och vissa upp till 100 mg per tablett, medan det dagliga intag som rekommenderas i USA är 0,03 mg. PRAC anger att risken är större hos barn och hos personer med nedsatt njurfunktion och ökar med dosen. FDA uppmanar den som tar biotin att berätta det för läkaren eller laboratoriet.
Nedbrytningen av biotin ökar vid behandling med vissa epilepsiläkemedel, vid alkoholkonsumtion och under graviditet enligt SCF. Livsmedelsverket råder att inte använda kosttillskott tillsammans med läkemedel utan att rådgöra med läkare.